طراحی کنترل داخلی به منظور تشخیص مایکوباکتریوم توبرکیلوسیس در روش PCR

Authors

الهام مسلمی استادیار، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد تهران شرق، گروه میکروب شناسی

محمد حسن شاه حسینی دانشیار، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد شهر قدس، گروه میکروب شناسی

مریم قهری کارشناس ارشد، موسسه ایرانیان ژن فناور، تهران

Abstract:

سابقه و هدف: سل به عنوان دومین علت مرگ و میر ناشی از عفونت شناخته شده است. روش های مولکولی مانند PCR، تکنیک های مناسبی برای شناسایی مایکوباکتریوم توبرکیلوسیس (MTB) هستند. بروز نتایج متفاوت در آزمایشگاه های مختلف، از معایب این تکنیک مولکولی است. این مطالعه با هدف طراحی، ساخت و کاربرد کنترل داخلی در روش PCR به منظور تشخیص MTB انجام شد. مواد و روش ها: به منظور ساخت کنترل داخلی ویژه MTB ، ابتدا پرایمرهای ویژه آزمون PCR برای تشخیص مولکولی بهینه و سپس حساسیت و ویژگی آن مشخص گردید. پرایمرهای مرکب (Composite Primer) برای IC-MTB نیز طراحی، تکثیر و سپس کلون شد. IC-MTB تکثیر شده در پلاسمید pTZ57R الحاق و در باکتری اشریشیا کلی JM107 ترانسفورم و کلون گردید. تعداد حداقل IC در هر واکنش PCR از طریق رقیق سازی و همچنین طیف پاسخ PCR همراه با کنترل داخلی مورد بررسی قرار گرفت. یافته ها: اندازه محصول تشخیصی MTB با پرایمرهای اختصاصی آن برابر با 245 جفت باز و محصول IC-MTB برابر با 660 جفت باز بود. که از نظر اندازه، اختلاف مطلوب را با هم دارند. تعداد حداقل IC در هر واکنش 1000 عدد تعیین شد. حداقل و حداکثر حساسیت روش PCR همراه با IC برای DNA باکتری مایکوباکتریوم توبرکیلوسیس بین 10 میلیون تا 10 باکتری محاسبه گردید. در ارزیابی ویژگی با عوامل مختلف نیز هیچ محصول ناخواسته ای مشاهده نشد. نتیجه گیری: استفاده از یک کنترل داخلی در روش PCR می تواند خطاها را در آزمون تشخیص مولکولی مایکوباکتریوم توبرکیلوسیس شناسایی نماید. در واقع تکثیر IC نشان دهنده انجام صحیح تمامی مراحل تکثیر و تشخیص می باشد.

Upgrade to premium to download articles

Already have an account?login

similar resources

طراحی کنترل داخلی به منظور تشخیص مایکوباکتریوم توبرکیلوسیس در روش pcr

سابقه و هدف: سل به عنوان دومین علت مرگ و میر ناشی از عفونت شناخته شده است. روش های مولکولی مانند pcr، تکنیک های مناسبی برای شناسایی مایکوباکتریوم توبرکیلوسیس (mtb) هستند. بروز نتایج متفاوت در آزمایشگاه های مختلف، از معایب این تکنیک مولکولی است. این مطالعه با هدف طراحی، ساخت و کاربرد کنترل داخلی در روش pcr به منظور تشخیص mtb انجام شد. مواد و روش ها: به منظور ساخت کنترل داخلی ویژه mtb ، ابتدا پر...

full text

تشخیص مایکوباکتریوم پاراتوبرکیلوسیس به روش Nested PCR در گاوهای شیری مشکوک به بیماری یون

سابقه و هدف: یون یک بیماری مزمن روده ای در نشخوار کنندگان اهلی و وحشی می باشد که عامل ایجاد آن مایکوباکتریوم پاراتوبرکیلوسیس است. این باکتری عامل بیماریزای مشترک بین انسان و دام است که گسترش جهانی دارد و نیازمند روشی مطمئن برای پیشگیری و کنترل می باشد. هدف از این پژوهش، ارائه روشی سریع و دقیق براساس Nested PCR برای تشخیص مایکوباکتریوم پاراتوبرکیلوسیس...

full text

کاربرد PCR در تشخیص مایکوباکتریوم توبرکولوزیس کمپلکس

مقدمه: تشخیص آزمایشگاهی توبرکولوزیس بر پایه آزمایش مستقیم و کشت می‌باشد. مشکل عمده، زمان‌بر بودن کشت مایکوباکتریوم توبرکولوزیس است. هدف از این مطالعه مقایسه سه روش آزمایشگاهی لام مستقیم، کشت و PCR برای تشخیص توبرکولوز بود. روش‌کار: تعداد 100 نمونه بالینی از مرکز پزشکی ملاهادی سبزواری در اصفهان گردآوری شد.PCR با استفاده از آغازگرهای MT1 وMT2 انجام شد که این آغازگرها DNA تمام سویه‌های مجموعه میکو...

full text